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產(chǎn)品詳情
操作說明
注意事項
產(chǎn)品簡介
抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase，TRAP）是破骨細胞的標志性酶，特異性分布于破骨細胞中。TRAP染色試劑盒即是用于顯示組織中的破骨細胞。其中基本原理在于，在含酒石酸的酸性條件下，抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP能將萘酚AS-BI磷酸鹽水解，產(chǎn)生的萘酚AS-BI與六偶氮副品紅結(jié)合，形成非水溶性的酒紅色物質(zhì)沉積在酶活性原位，從而實現(xiàn)對抗酒石酸酸性磷酸酶的顯色和定位。
本產(chǎn)品基本組成成分：反應緩沖液主要成分為醋酸緩沖液及酒石酸鉀鈉，pH約5.0；六偶氮副品紅溶液，含六偶氮副品紅；亞硝酸鈉溶液主要成分為4%亞硝酸鈉；AS-BI磷酸鹽底物溶液，主要成分為20 mg/mL萘酚AS-BI磷酸鹽。經(jīng)本產(chǎn)品染色后，破骨細胞中的TRAP呈酒紅色，定位于細胞漿。按照切片上每個組織點300 μL用量，本試劑盒可以做50次以上TRAP染色。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；4℃避光保存，其中AS-BI磷酸鹽底物溶液-20℃保存，有效期12個月。
組成
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Component Number |
Component |
G1050-50T |
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G1050-1 |
反應緩沖液 |
20 mL |
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G1050-2 |
六偶氮副品紅溶液 |
1 mL |
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G1050-3 |
亞硝酸鈉溶液 |
1 mL |
|
G1050-4 |
AS-BI磷酸鹽底物溶液 |
1 mL |
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說明書 |
1份 | |
使用方法
實驗前準備
配制TRAP工作液：
（1）取50 μL六偶氮副品紅溶液（G1050-2）與50 μL亞硝酸鈉溶液（G1050-3）在潔凈離心管中混勻，得到副品紅溶液；
（2）向第1步的100 μL副品紅溶液中加入100 μL AS-BI磷酸鹽底物溶液（G1050-4），吹吸數(shù)次充分；
（3）吸取1.8 mL反應緩沖液（G1050-1）加入到第2步的混合液中充分混勻；
（4）第3步的混合液經(jīng)針式濾器過濾（0.45 μm水系濾膜）即得到TRAP工作液。
注意：務必按照所屬順序配制工作液。每個組織點大約需要200-300 μL工作液，根據(jù)使用量配制，現(xiàn)配現(xiàn)用，避免浪費。
石蠟切片操作步驟（供參考）
1. 石蠟切片脫蠟至水，純水洗數(shù)分鐘。
2. 將切片用組化筆化圈后放在（加有一定量的防止切片蒸干的純水）濕盒中，用純水37℃孵育2 h。
3. 切片孵育完成后傾去純水，滴加過濾好的TRAP工作液覆蓋組織，置于37℃避光反應20-30 min。
4. （可選，自備相關試劑）復染細胞核：傾去孵育液并水洗，以蘇木素染液進行染核。
5. 脫水，透明，以中性樹膠封片。
細胞爬片操作步驟（供參考）
1. 細胞固定：吸除細胞培養(yǎng)液，加入4%多聚甲醛（推薦G1101）固定15-30 min，蒸餾水洗3次。
2. 細胞破膜：以0.2% Triton X-100溶液覆蓋細胞進行破膜處理20-30 min，蒸餾水輕洗3遍。
3. 孵育染色：將TRAP工作液加到細胞孔板內(nèi)覆蓋細胞，37℃避光孵育1-2 h，蒸餾水洗3次。
4. （可選，自備相關試劑）細胞核復染：吸除孵育液并水洗，以蘇木素染液進行染核。
5. 加入適量無水乙醇脫水，取出孔板中的蓋玻片，吹風機吹干，倒扣在潔凈的載玻片上以中性樹膠封片。
本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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