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產品詳情
操作說明
注意事項
產品描述
本產品是適用于大鼠和小鼠外周血淋巴細胞分離的梯度密度分離液，其原理主要是根據(jù)外周血不同細胞之間的密度差異（紅細胞和粒細胞密度大約為1.090 g/mL；血小板密度1.030-1.035 g/mL；淋巴細胞和單核細胞密度1.075-1.090 g/mL），通過梯度密度離心，將淋巴細胞從外周血中分離出來。本產品為無菌、低內毒素水平的即用型分離液，液密度為1.083 ± 0.001 g/mL（20℃）。嚙齒動物的淋巴細胞密度稍高于人淋巴細胞，且小鼠外周血分離易溶血。根據(jù)這些特性，本產品在傳統(tǒng)Ficoll-泛影葡胺基礎上進行了優(yōu)化，能夠在血液加入后較長的時間內維持分離液的穩(wěn)定性，且使用操作簡單且分離的淋巴細胞純度高、狀態(tài)好。
儲存與運輸
冰袋(wet ice)運輸；2-8℃避光保存，有效期12個月。
操作步驟
以分離1 mL鼠類外周血淋巴細胞分離為例，血液和淋巴細胞分離液體積比為1:1-1:2，在此范圍內適當調整；選擇離心管時需注意，血液和淋巴細胞分離液總體積不超過離心管容積的三分之二。
1. 取新鮮抗凝全血（肝素、EDTA、枸櫞酸鈉等抗凝劑皆可）1 mL，加入等體積PBS或者無鈣鎂Hanks緩沖液稀釋，即得到2 mL稀釋的全血；
2. 吸取大小鼠外周血淋巴細胞分離液3 mL加入到15 mL無菌離心管中；
3. 將離心管傾斜45°，將2 mL稀釋后的血液沿管壁緩慢加入到離心管中，使血液平鋪在大小鼠外周血淋巴細胞分離液上層；
4. 建議使用水平轉頭離心機離心，將離心管置于水平轉頭適配器中，降低離心機加減速（3-5檔為宜），室溫條件下800 g離心25 min；
5. 離心后，輕拿離心管置于管架上，可觀察到明顯的分層現(xiàn)象：最上層是血漿層；中上白膜層是淋巴細胞層；中下層為淋巴細胞分離液層；最下層為紅細胞和粒細胞層（參考附圖）；
6. 吸除最上層血漿層，小心吸取白膜層（淋巴細胞層）到另外一個潔凈的無菌離心管；
7. 用8 mL PBS或其他緩沖液洗滌后，100 g離心10 min，棄上清；
8. 重復步驟7（可選）
9. 根據(jù)實驗目的用所需培養(yǎng)基或緩沖液重懸淋巴細胞。
注意事項
1. 本產品在使用前需室溫充分平衡并顛倒混勻，分離時溫度以18-25℃為宜。
2. 為保持淋巴細胞的活性，血液最好選取采血2 h以內的新鮮抗凝血液；如需對分離的淋巴細胞進行進一步的培養(yǎng)和檢測，請在采血和分離的過程中注意無菌操作。
3. 稀釋或洗滌緩沖液，不可使用含鈣、鎂離子的緩沖液，以免導致血細胞凝聚。
4. 過多的吸取白膜層以外的成分，會導致交界處的一些粒細胞或血小板等被混入。
5. 由于不同血液樣本間的差異，可能對分離效果產生影響?？蛻艨筛鶕?jù)實際情況適當調整離心力和時間，參考離心力和時間范圍為：500-1000 g、20-30 min。
6. 將血液和淋巴細胞分離液混合一定時間后，出現(xiàn)紅細胞沉降屬于正?，F(xiàn)象。
7. 為了您的健康和安全，操作時請穿好實驗服、戴好手套。
附圖：分離前后，各層示意圖
本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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