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支原體檢測試劑盒(PCR法)

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貨號:
FKU019
產品規(guī)格:
50T
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產品詳情 操作說明 注意事項

產品信息

產品名稱

產品編號

規(guī)格

支原體檢測試劑盒(PCR法)

FKU019

50T


產品簡介

支原體污染會對細胞各個方面都造成不良影響,已經成為細胞培養(yǎng)中高度重視的問題,因此,定期進行支原體污染檢測是十分必要的。本支原體檢測試劑盒是采用PCR方法,特異性的檢測各種培養(yǎng)細胞生物材料(如細胞培養(yǎng)物、實驗動物分泌物、動物血清等)中支原體的污染。試劑盒使用的混合引物是針對支原體16s rRNA序列的保守區(qū)域設計的特異性引物,可直接使用細胞培養(yǎng)液作為PCR模板,特異性擴增支原體DNA,搭配配套的Mycoplasma PCR Mix(2×)一小時內即可完成,本試劑盒檢測靈敏度高,可檢測低至20個拷貝的支原體。


儲存與運輸

冰袋(wet ice)運輸;-20℃保存,有效期12個月。


組成

Component Number

Component

G1900-50T

G1900-1

Mycoplasma PCR Mix(2×)

1 mL

G1900-2

Mycoplasma Primer Mix

100 μL

G1900-3

Positive Control

50 μL

G1900-4

Mycoplasma Free Water

1 mL

說明書

1份


操作步驟

1. 樣品準備:取適量待檢細胞培養(yǎng)上清于潔凈的PCR管中,利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可利用Mycoplasma Free Water稀釋后,取適量樣本于潔凈的PCR管中,利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板;

2. PCR體系配制:每次實驗需設置陰性對照(將1 μL待檢樣品換成等量的Mycoplasma Free Water)與陽性對照(在1 μL待檢樣品中加入0.5 μL Positive Control后一起作為Template),實驗時戴一次性口罩與手套,謹慎操作,防止操作不當引入外源支原體污染;

Component

Volume

Template

1 μL

Mycoplasma Primer Mix

2 μL

Mycoplasma PCR Mix(2×)

10 μL

Mycoplasma Free Water

To 20 μL

3. PCR程序設置

Step

Temperature

Time

Cycles

Initial Denaturation

98℃

2 min

1

Denaturation

98℃

20 s

30

Annealing

56℃

25 s

Extension

72℃

10 s

Final extension

72℃

5 min

1

Hold

4-16℃

Forever


 

4. 凝膠電泳:取10 μL PCR產物,使用1%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測;

5. 結果分析:每次實驗通過與陰性對照、陽性對照檢測結果比較確認樣品支原體污染情況,陽性條帶大小500 bp左右。如陰性對照檢測結果中有條帶很有可能是PCR體系中出現污染,建議重新實驗確認結果。如有必要,也可對PCR產物進行常規(guī)測序,以確定具體的支原體種屬。


注意事項

1. 本試劑盒可以檢測M.orale,M.arginini,M.bovis,M.fermentans,M.gallisepticum,M.hominis,M.pirum,Ureaplasma spp,M.hyorhinis,M.pneumoniae,A.laidlawii等至少11種以上支原體污染。

2. 所有試劑在使用前于冰上徹底解凍、混勻,使用完畢后于-20℃保存。

3. 每次實驗必須設置陰性對照、陽性對照,實驗組建議設置樣品模板梯度。

4. 操作時必須佩戴口罩,嚴格按照PCR操作標準,防止引入外源污染影響實驗結果。

5. 為了確保細胞實驗的可靠性及穩(wěn)定性,建議定期進行支原體污染檢測。

6. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

產品僅供科研用途,不用于臨床診斷!


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