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產品詳情
操作說明
注意事項
產品簡介
RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一種傳統(tǒng)的細胞及組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解組織、細胞得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的PAGE、Western、免疫沉淀（immunol precipitation, IP）、免疫共沉淀（CO-IP）等實驗。RIPA裂解液有很多配方，按其裂解效果主要分為強，中，弱三種。本裂解液為RIPA弱裂解液，其主要成分為：50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl，1 mM EDTA-2Na2，0.25% Sodium deoxycholate，和1% NP-40。本產品適用于動物或植物組織及細胞樣品，也可用于真菌或細菌樣品。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；4℃避光保存，有效期12個月。
使用方法
自備蛋白酶抑制劑。RIPA裂解液（弱）在臨用前需加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白降解。以下使用方法中提到的RIPA裂解液(弱)均指已添加蛋白酶抑制劑。
對于組織樣品：
1. 組織塊用預冷PBS洗滌，去除血污，剪成細小碎塊置于勻漿器中。
2. 加入10倍組織體積RIPA裂解液(弱)低溫勻漿。注意，RIPA裂解液(弱)的使用量可按照約每50 mg組織與1 mL裂解液的比例添加。如組織蛋白含量較低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白濃度。
3. 將勻漿液轉移至1.5 mL離心管中，振蕩。冰浴30 min，期間每10 min用移液器反復吹打，確保組織細胞完全裂解。
4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
對于貼壁細胞樣品：
1. 用PBS清洗細胞2-3次，最后一次徹底吸干殘留液。
2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例吸取RIPA裂解液(弱)于細胞培養(yǎng)板、瓶內，反復晃動培養(yǎng)板、瓶，使裂解液與細胞充分接觸3-5 min。
3. 用細胞刮刀將細胞刮下，收集到離心管中。
4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
對于懸浮細胞樣品：
1. 離心收集細胞。
2. 按照6孔板每孔細胞250 μL裂解液的比例將細胞液與RIPA裂解液(弱)混合，振蕩。
3. 冰浴30 min，期間每10 min用移液器反復吹打數(shù)次，確保細胞完全裂解。
4. 12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
對于細菌或真菌樣本：
1．取1 mL菌懸液，離心去上清，PBS洗滌一次，充分去除液體。渦旋使菌體盡量分散。
2．加入100-200 μL RIPA裂解液(弱)，輕輕渦旋使菌體與裂解液充分混勻。
3．冰浴10 min，期間每2 min用移液器反復吹打數(shù)次，確保菌體完全裂解。
4．12000 g離心5 min，收集上清，即為總蛋白溶液。
注意事項
1. 組織或細胞裂解時可能會出現(xiàn)粘稠狀?？捎靡埔浩鞣磸痛荡蚧驕u旋儀振蕩，直至呈液狀為止。如果一直較稠，可再加入適量裂解液。
2. 本試劑不含有蛋白酶抑制劑，需自備蛋白酶抑制劑并在臨用前加入。
3. 操作時請穿實驗服，并佩戴一次性手套。
本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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