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產(chǎn)品詳情
操作說明
注意事項
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使用目的：
本試劑盒用于測定血清、血漿及相關(guān)液體樣本中的指標(biāo)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中指標(biāo)水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。
試劑盒組成
|
1 |
30倍濃縮洗滌液 |
20ml×1瓶 |
7 |
終止液 |
6ml×1瓶 |
|
2 |
酶標(biāo)試劑 |
6ml×1瓶 |
8 |
標(biāo)準(zhǔn)品 |
0.5ml×1瓶 |
|
3 |
酶標(biāo)包被板 |
12孔×8條 |
9 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
|
4 |
樣品稀釋液 |
6ml×1瓶 |
10 |
說明書 |
1份 |
|
5 |
顯色劑A液 |
6ml×1瓶 |
11 |
封板膜 |
2張 |
|
6 |
顯色劑B液 |
6ml×1/瓶 |
12 |
密封袋 |
1個 |
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可在小試管中進行稀釋。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行
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